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技術專欄

免疫分析技術

利用抗原抗體特異性結合反應檢測各種物質(藥物、激素、蛋白質、微生物等)的分析.主要集中在以下幾方面:(1)實驗藥物動力學和臨床藥物學中測定生物利用度和藥物代謝動力學數等;(2)在藥物的臨床檢測中,監測藥物血液濃度;(3)在線監測藥物生產中有效組分的含量;(4)對藥品中特定的微量有害雜質進行評價。

免疫分析分類

非標記免疫分析技術:免疫擴散、免疫電泳

標記的免疫分析技術:酶免疫分析、放射免疫分析、其它免疫分析法(熒光免疫技術、膠體金免疫技術、發光免疫技術和鐵蛋白免疫技術等)

免疫擴散

基本原理:可溶性的抗原和相應的抗體在溶液或凝膠中彼此接觸,形成不溶性抗原-抗體復合物沉淀。

單向免疫擴散(Single immunodiffusion)

基本原理:指抗原和抗體兩 種成分中只有一種擴散,另 一種被固定在凝膠中。

雙向免疫擴散(Double immunodiffusion)

基本原理:指可溶性抗原與相應抗體在瓊脂介質中相互擴散,彼此相遇后形成一定類型的特異性沉淀線。

電泳技術分類

基本原理:免疫擴散與電泳技術相結合。

類型:對流免疫電泳、火箭免疫電離、免疫電泳、雙向免疫電泳(交叉免疫電泳)

對流免疫電泳

基本原理:多數蛋白質抗原在堿性緩沖液中帶負電荷,在電泳時從負極向正極移動?贵w在堿性緩沖液只帶微弱的負電 荷,且相對分子質量較大,電泳力較小,在瓊脂電滲力作用 下由正極向負極移動。結果抗原和抗體定向對流,在兩孔間 相遇時發生反應,并在比例合適處形成肉眼可見白色沉淀線。

火箭免疫電泳(Rocket immunoelectrophoresis)

基本原理:也稱免疫擴散,抗原在含有定量抗體的瓊脂糖中泳動,兩者比例適宜時,在較短時間內生成錐形的沉淀峰。在一定濃度范圍內,沉淀峰的高度與抗原含量成正比。

免疫電泳

基本原理:先將待側樣本作瓊脂凝膠電泳,各蛋白抗原組分被分成不同的區帶,然后與電泳方向平行挖一小槽,加入相應的抗血清,把分成區帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴散,在各區帶相應的位置形成沉淀弧。 

標記技術分類

基本原理:采用熒光素、同位素或酶等示蹤物質 標記抗體(或抗原)進行抗原 -抗體反應,通過對免疫復合物中的標記物的測定,達到對免疫反應進行監測的目的。

標記免疫技術主要類型:放射免疫技術、酶免疫技術、熒光免疫技術、化學發光免疫技術

放射免疫標記技術(RIA

基本原理:根據抗原抗體特異性結合的原理,以放射性同位素標記抗原或抗體,根據射線的多少定性或定量測定待檢標本中抗體或抗原的量。

酶免疫標記技術(ELISA

基本原理:指酶標記抗體或酶標記抗體進行的抗原抗體反應,然后通過酶與底物產生顏色反應,用于定量測定。

熒光免疫分析(FIA

基本原理:以熒光素標記抗體或抗原作為示蹤劑的一種新的免疫分析技術,其原理與ELISA相似。該法既可對液體中的抗原和抗體定量,也可對組織切片中的抗原、抗體進行定性和定量。一般由于樣品、試劑的自身熒光和激發光的散射,本底熒光高,影響了測定的靈敏度。一般以鑭系元素作為熒光標記(示蹤劑)。示蹤劑與相應抗原或抗體結合后,借助熒光檢測儀察看熒光現象或測量熒光強度,從而判斷抗原或抗體的存在、定位和分布情況或檢測受檢標本中抗原或抗體的含量。

膠體金免疫技術(CGIA 

基本原理:以膠體金作為示蹤標記物,主要利用了金 顆粒具有高電子密度的特性 ,在金標蛋白結合處,在顯 微鏡下可見黑褐色顆粒,當 這些標記物在相應的配體處 大量聚集時,肉眼可見紅色 或粉紅色斑點。

化學發光免疫技術(CLIA 

基本原理:利用化學或生物發光系統作為抗原抗體反應的指示系統,借以定量檢測抗原或抗體的方法,發光物質可直接作為抗原抗體的標記物,也可以游離形式用于催化劑(酶)和輔助劑標記的抗原或抗體的發光反應中。

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